细胞穿透肽与小鼠胰岛素原融合表达载体的构建及表达

北京市第四中学

作者：孙森淼

辅导教师：韩晓彬  戚豫

项目简介

本研究通过构建细胞穿透肽（cell-penetratingpeptide.CPP）与小鼠胰岛素原的融合表达载体，用以验证CPP的有无对于胰岛素跨细胞膜转运能力以及胰岛素与膜受体结合能力的影响，藉以探讨粘膜给药的新途径。研究中首先提取小鼠胰腺组织，应用RT-PCR获得胰岛素原基因，与PEP-1和DPV3两种CPP基因融合，构建PSB1-CPP-proINSULIN融合表达载体，转化BL21(DE3)菌，经IPTG诱导、超声破碎细菌、GlutathioneSepharose4B树脂纯化融合蛋白，应用胰酶消化制备胰岛素并作用于Hela细胞，通过间接免疫荧光分析融合蛋白跨膜转运情况以及对葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）转位的影响。结果显示成功构建胰岛素原与上述两种CPP的融合表达载体；基因测序显示CPP与胰岛素原基因序列正确，同时SDS-PAGE也显示IPTG诱导表达的DPV3胰岛素原融合蛋白分子量大小与预期值相当；间接免疫荧光研究显示DPV3具有良好的协助胰岛素进入细胞的能力，DPV3胰岛素融合蛋白在促进GLUT4转运能力上与未融合DPV3的胰岛素相近。提示CPP与胰岛素融合经粘膜给药途径用以补充胰岛素的潜在应用价值。

我一直关注糖尿病治疗方面的问题，也有机会利用很多的时间在北京四中现代生物实验室和北大医院实验中心学习和实验研究。通过查阅文献了解到细胞穿透肽具有协助外源蛋白跨膜转运中的特殊作用，于是便产生了利用细胞穿透肽促进胰岛素跨膜转运以解决跨粘膜吸收胰岛素并抑制自身免疫等问题的想法。

本研究的创新点：首次构建了细胞穿透肽DPV3与胰岛素原的融合表达载体，验证了DPV3能够携带胰岛素跨细胞膜转运。

下一步工作是利用单层上皮细胞验证融合蛋白的跨细胞转运能力；并通过建立小鼠糖尿病模型验证CPP胰岛素融合蛋白在在载体条件下对糖代谢水平的影响。

本资源为本网站独家发布。

转载申明

本网为免费通用技术网，本站独创内容，未经本网授权，任何个人、企业、机构不得以任何方式擅自转载、转贴或者以其他方式复制用于商业目的。

转载或引用本网站上所有内容，必须符合以下规定：

(1)用于商业目的的必事先经过本网同意；

(2)非用于商业目的的转载或引用本网内容必须是作为新闻性或资料性公共免费信息，原则上也须经本网同意。

(3)转载或引用本网内容必须合理、善意引用，不得对本网内容原意进行曲解、修改；

(4)转载或引用本网站所有内容须注明“转自通用技术网www．tyjs．org。”字样。

未经同意转载，一经发现，法律追究。